





外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于peg沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于---培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,外泌体电镜检测,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,外泌体电镜,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、nta检测(粒径及浓度鉴定)、wb(分子标志物)。nta检测作为外泌体鉴定的---方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了---检测,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。

铁死亡主要有以下几个特点:
铁死亡,细胞死亡过程中伴随着大量的铁离子的累积,同时还会出现脂质---化,ros升高,也有一些调控铁稳态和脂质---化代谢等方面的基因发生变化,
铁死亡,在细胞的细微结构中,会出现比正常细胞小的线粒体,且线粒体膜皱缩,同时线粒体嵴减少或消失,外膜破碎,但细胞核中形态变化不明显。
铁死亡(ferroptosis)早由哥伦比亚大学dr. brent r.stockwell在2012年提出,是一种铁依赖性的,区别于细胞凋亡、细胞坏死、细胞自噬的新型的细胞程序性死亡方式。铁死亡的的本质是谷1胱1甘1肽的耗竭,谷1胱1甘1肽---化物酶(gpx4)活性降低,外泌体电镜服务,
脂质氧化物不能通过gpx4催化的谷1胱甘肽还原酶反应代谢,之后二价的铁离子氧化脂质产生活性氧,从而促使铁死亡的发生。

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