





itraq (isobarictags for relative&absolute quantitation,同位素标记相对和绝1对定量)是由ab sciex公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝1对定量技术。该技术使用8种(或4种)不同的同位素试剂来同时标记和比较8种(或4种)不同的蛋白质样品。这些试剂由3个不同的化学标签组成:报告部分,肽反应部分和平衡部分。报告部分为客户可按需选择标记个数,肽反应基团将itraq标签与肽段的n-端基团和每个赖氨酸侧链相连,可标记所有酶解肽段,平衡部位可---itraq试剂标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比,因此改变任一itraq试剂,不同同位素在标记同一多肽后在一级质谱检测,外泌体mirna测序检测,分子量都完全相同。而在串联质谱中,同重元素标记肽段平衡基团在二级质谱发生中性丢失。信号离子表现为不同质荷比的峰,因此,根据波峰的高度及面积,可以得到蛋白质的定量信息。

外泌体与微泡:我们知道,细胞间相互作用可以通过释放蛋白质、---、脂质等分子到胞外与受体结合从而介导胞内细胞传导。
除此之外,细胞还可以释放膜囊泡,外泌体与微泡就是其中两种,二者相似但形成方式不同:外泌体是细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体,经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中的膜囊泡,而微泡则是细胞出芽与细胞膜融合后直接脱落形成的囊泡,且外泌体大小均一, 直径在40~100 nm,其大小取决于其起源部位以及细胞中的脂质双层结构;而微泡大小不一,直径在50 ~1000 nm之间。
实验室采用zetaview(品牌:particle metrix)进行外泌体浓度粒径测试服务。其方法即纳米颗粒---分析(nanoparticle tracking ---ysis,nta),原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析,结合stockes-einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。nta技术已被外泌体研究领域---为外泌体表征手段之一;相较于其他表征方式,nta技术的样本处理更简单、更能---外泌体原始状态、检测速度更快。zetaview包含的微电泳技术,也可进行zeta电位的检测。
目前配备为488nm波长的激光器,且搭配对应的滤光片,可以测量荧光抗1体标记的外泌体。

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