





原位杂交(in situ hybridization)将标记的---探针与细胞或组织中的---进行杂交,称为原位杂交。使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。rna原位---杂交又称rna原位杂交组织化学或rna原位杂交。该技术是指运用crna或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内rna表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的rna核苷酸片段,按---杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 (hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mrna、rrna和trna分子。rna原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已---出dna原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已 成为有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mrna表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。

原位杂交杂交液注意事项:
(1)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、---胺、---葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体dna或rna等。
(2)杂交液中含有较高浓度的na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。---胺可使tm降低,杂交液中含每1%的---胺可分别使rna:rna,rna:dna,dna:dna的杂交温度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以杂交液中加入适量的---胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。---葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,擅长染色体原位杂交的公司,以达到提高杂交率的目的(尤其对双链---探针)。
在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体dna或rna等,都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特---结合,以减低背景。

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,fish)是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料[1,2].fish的基本原理是将dna(或rna)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或dna纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特---结合来检测dna序列在染色体或dna纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.fish具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

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