分子病理技术服务-科锐诺生物科技

原位杂交（in situ hybridization）将标记的---探针与细胞或组织中的---进行杂交，称为原位杂交，使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。

       原位杂交技术的基本原理是利用---分子单链之间有互补的碱基序列，将有放1射性或非放1射性的外源---(即探针)与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对，结合成专一的---杂交分子，经一定的检测手段将待测---在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的---序列必须具备3个重要条件：组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物

阻断内源性---化物酶：滴加3%1甲1醇-h2o2，室温避光孵育15min，将玻片置于pbs（ph7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

预杂交：滴加预杂交液，37°c孵育1h。

杂交：倾去预杂交液，滴加含探针has-circ-st6galnac6 probe 杂交液，浓度6ng/ul，恒温箱37度杂交过夜。

杂交后洗涤：洗去杂交液，分子病理技术服务，2×ssc，37°c 洗10min，1×ssc，37°c洗2×5min，0.5×ssc室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加---胺洗涤。

滴加封闭液：滴加封闭血1清（正常兔血1清），室温30min。

滴加鼠抗地1高辛标记---化物酶（anti-dig-hrp）：倾去封闭液，滴加anti-dig-hrp。37°c孵育50min，后pbs洗3次×5min。