





意义
在研究dna分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,水稻rna原位杂交技术服务,形成dna-dna、dna-rna或 rna-rna 双键分子的特点,应用带有标记的(有性同位素,如3h、35s、32p、荧光素生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针,与组织切片或细胞内待测---(rna或dna)片段进行杂交,然后可用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的 mrna或dna 的存在并定位;用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有---的敏感性和特---,可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
荧光原位杂交技(fish)原理:是利用荧光标记的特异---探针与细胞内相应的靶dna分子或rna分子杂交,通过在荧光显微镜或共---激光扫描仪下观察荧光信号,来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,或者是结合了荧光探针的dna区域或rna分子在染色体或其他细胞器中的定位。
荧光原位杂交技(fish)实验步骤:
1、组织固定:组织取出洗净后立即放入固定液(depc水配制)中固定2-12h。
2、脱水:组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡,包埋。
3、切片:石蜡经切片机切片,摊片机捞片,62°烤箱烤片2h。
4、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲1---ⅰ 15min-二甲1---ⅱ 15min-无水---ⅰ 5min-无水---ⅱ 5min,风干,depc水浸泡。
5、---:根据组织固定时间长短,切片于修复液中煮沸10分钟,自然冷却。后基因笔画圈,根据不同组织不同指标特性,滴加蛋白酶k(20ug/ml) 37°---20min。纯水冲洗后pbs洗3次×5min。

基因芯片又称dna芯片或dna微阵列。其原理是在固体载体(硅片、玻片、硝1酸纤维素膜)上按照特定的排列方式集成大量已知dna/cdn---段,形成dna/cdna微矩阵。 基因芯片技术是一门新兴的技术,由于该技术能在一次实验中自动、快速、敏感地同时检测数千条序列,而且获得的序列信息高度特异、稳定。根据探针类型分为dna芯片和cdna芯片,前者用于检测基因突变,实现肿1瘤早期诊断、判断预后及治1疗;后者用于检测基因表达,对肿1瘤进行发现性分类和预测性分类。

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