既要充分保留被测---，（---是rna）不被降解，又要尽可能维持原有组织或细胞的形态结构。
步骤：基本与免1疫组织化学技术相似，即组织要求新鲜和迅速投入固定液。固定液为4%---/0.1 m pbs（ph7.0-7.6），含有1/1000 depc。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。取材过程中避免手指、唾液和未经rna酶抑制处理的器具接触标本。冷冻切片以厚5~30um佳，40℃烤箱内干燥2小时后储存在-80℃---温冰箱，在-20℃可保存２～３周，在-70℃可保存数月之久。
原位杂交（in situ hybridization）将标记的---探针与细胞或组织中的---进行杂交，称为原位杂交。使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。rna原位---杂交又称rna原位杂交组织化学或rna原位杂交。该技术是指运用crna或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内rna表达的一种原位杂交技术。其基本原理是：在细胞或组织结构保持不变的条件下，用标记的已知的rna核苷酸片段，按---杂交中碱基配对原则，与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合（杂交），所形成的杂交体 (hybrids）经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mrna、rrna和trna分子。rna原位杂交技术 经不断改进，其应用的领域已---出dna原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析，已 成为有效的分子病理学技术，同时在分析低丰度和罕见的mrna表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。
荧光原位杂交技（fish）原理：是利用荧光标记的特异---探针与细胞内相应的靶dna分子或rna分子杂交，通过在荧光显微镜或共---激光扫描仪下观察荧光信号，来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布，或者是结合了荧光探针的dna区域或rna分子在染色体或其他细胞器中的定位。
荧光原位杂交技（fish）实验步骤：
1、组织固定：组织取出洗净后立即放入固定液（depc水配制）中固定2-12h。
2、脱水：组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡，玉米原位杂交检测服务，包埋。
3、切片：石蜡经切片机切片，摊片机捞片，62°烤箱烤片2h。
4、石蜡切片脱蜡至水：依次将切片放入二甲1---ⅰ 15min-二甲1---ⅱ 15min-无水---ⅰ 5min-无水---ⅱ 5min，风干，depc水浸泡。
5、---：根据组织固定时间长短，切片于修复液中煮沸10分钟，自然冷却。后基因笔画圈，根据不同组织不同指标特性，滴加蛋白酶k(20ug/ml) 37°---20min。纯水冲洗后pbs洗3次×5min。
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