分子病理技术服务-科锐诺

 滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。

  .滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

滴加sabc：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

滴加生物素化---化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。

dab显色：使用dab显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂ａ，ｂ，c各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配dab显色剂后显色。充分水洗。

.苏1木素复染，充分水洗。

酒精脱水，二甲1---透明，封片。

癌组织原位杂交实验步骤：

       1. 将准备做原位杂交的样本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。

       2. 玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或apes。

       3. 石蜡切片经常规脱蜡至水。30%h2o2 1份+蒸馏水10份混合，室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

       4. 暴露mrna---片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶（1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀），分子病理技术服务，37℃或室温---3--30分钟（视标本新旧、厚薄自行调整）。原位杂交用pbs洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

分子病理学在蛋白质和---等生物大分子水平上，应用分子生物学理论、技术及方法研究---发生l发展的过程，从而为传统的病理学注入了生机。在如今的---病理诊断过程中，运用---原位杂交、pcr技术、免1疫荧光、免1疫组织化学染色等技术，能够深化对---的本质认识，对于肿1瘤的诊断和治1疗也有着---的指导意义。分子病理学诊断主要应用于以下几个方面：1、对于肿1瘤---的检测，对于肿1瘤高危人群的筛检具有实用价值，如检测gstπ基因以判定个体暴露于---物是的---危险性。2、肿1瘤相关---的检测，如采用原位杂交方法检测标本中hpv、eber等---。



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