武汉科锐诺-植物基因组原位杂交检测服务

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    2023-6-30

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将少数菌落转移到纤维素滤膜上

(1) 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

(2) 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

(3) 倒置平板,于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

(4) 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

(5) 用parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果。

(6) 裂解---,按本段下面所述方法,使释放的dna结合于纤维素滤膜。





荧光原位杂交技(fish)原理:是利用荧光标记的特异---探针与细胞内相应的靶dna分子或rna分子杂交,通过在荧光显微镜或共---激光扫描仪下观察荧光信号,来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,或者是结合了荧光探针的dna区域或rna分子在染色体或其他细胞器中的定位。

       荧光原位杂交技(fish)实验步骤:

       1、组织固定:组织取出洗净后立即放入固定液(depc水配制)中固定2-12h。

       2、脱水:组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡,包埋。

       3、切片:石蜡经切片机切片,摊片机捞片,62°烤箱烤片2h。

       4、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲1---ⅰ 15min-二甲1---ⅱ 15min-无水---ⅰ 5min-无水---ⅱ 5min,风干,depc水浸泡。

       5、---:根据组织固定时间长短,切片于修复液中煮沸10分钟,自然冷却。后基因笔画圈,根据不同组织不同指标特性,滴加蛋白酶k(20ug/ml) 37°---20min。纯水冲洗后pbs洗3次×5min。








tunel流式细胞凋亡检测服务通常称为细胞程序性死1亡,是由基因控制的主动性细胞死1亡过程。越来越多数据发现,细胞凋亡与多种---密切相关,如癌细胞具有连续增殖、抵抗细胞凋亡能力,利用流式细胞仪分析细胞凋亡可为肿1瘤诊断,疗1效评价和预后预测提供了重要的参考指标。

  tunel(tdt-mediated dutp nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核dna的断裂情况,其原理是生物素biotinylate标记的dutp在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(tdt enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂dna的3’-oh末端,并与连接辣根---化酶(hrp,horse-radish peroxidase)的链霉亲和素streptavidin特---结合,后者又与pod底物h2o2、二氨1基联1---1胺(dab)产生深棕色反应,特异准确地定位正在凋亡的细胞,植物基因组原位杂交检测服务,因而在光学显微镜下即---察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有dna断裂,因而没有3‘-oh形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿1瘤药的药1效评价,以及通过双色法确定细胞类型和分化阶段。




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