分子病理技术服务-科锐诺

原位杂交第三天

1） 用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlmabt置换，25分钟，再用1mlmabt溶液置换，一小时以上，后用1mlmabt溶液置换，25分钟。

2） 用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul bm purple ap substrate（底物，用之前加5mm左旋米唑），十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用pbst洗两三次后加上4%---固定，拍照。

6）4c冰箱保存。

原位杂交是指将特定标记的已知顺序---为探针与细胞或组织切片中---进行杂交，分子病理技术服务，从而对特定---顺序进行精1确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

原位杂交的特点是杂交在显微镜载玻片上中期染色体标本上进行。所谓原位即指标本上dna原位变性，在利用放1射性或非放1射性标记的已知---探针杂交后，通过放1射自显影或非放1射性检测体系来检测染色体上特异dna或rna顺序，可用放1射性颗粒在某条染色体的区带出现的频率或荧光的强弱来确定探针的位置，从而进行准确的基因定位。

分子病理学诊断主要应用于以下几个方面：1、对于肿l瘤---的检测，对于肿l瘤高危人群的筛检具有实用价值，如检测gstπ基因以判定个体暴露于---物是的---危险性。2、肿l瘤相关---的检测，如采用原位杂交方法检测标本中hpv、eber等---。3、疑难肿l瘤的诊断和分类，尤其在鉴别诊断淋巴细胞增l生性---与淋巴细胞性肿l瘤上有着---的特---和---性。4、肿l瘤的个体化治l疗，能够根据肿l瘤发生l发展不同阶段分子水平的特点，对肿l瘤的个体化和预见性治l疗具有指导意义。5、肿l瘤的预后判断，如采用荧光原位杂交技术（fish）检测her-2基因在乳l腺l癌---中的表达情况，配合术后治l疗，指导---用药选择。




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