武汉科锐诺-水稻原位杂交检测服务

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    2023-7-25

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.杂交 (1) 盛有2×ssc的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,而在50%---胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。(5) 将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,盛滤膜的容器应盖严,水稻原位杂交检测服务,以防液体蒸发。




原理

原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的---复性结合而使得组织细胞中的特------得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在---的原有位置上显示出来。

经特定标记的核苷酸链为探针,可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检dn---段或mrna进行杂交,然后显示标记物,从而分析待检---的分布和含量。利用此项技术可研究各种基因在染色体上的定位,编码某种蛋白质的mrna在胞质中的表达。










荧光定量pcr(realtimepcr)技术是近几年基于普通pcr技术发展的一种新技术。它借助荧光信号来检测pcr产物,通过荧光染料或荧光标记的特异探针,对pcr产物进行标记---,在扩增过程中,每经过一次循环,荧光定量pcr仪就会收集一次荧光信号,实时检测整个pcr进程。用荧光定量pcr法检测目的基因仅需检测样本是否具有扩增信号即可,且pcr反应具有---扩增的高1效性,可检测出微小突变。根据探针标记不同可分为taqman探针法和arms法。

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