科锐诺-植物原位杂交测试服务

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    2023-8-10

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点对点酵母双杂交验证实验流程

1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测;

2、共转化:分别将诱饵/捕获质粒(pgbkt7-bait/pgadt7-prey)、阳性对照质粒(pgbkt7-p53/pgadt7-t)、阴性对照质粒(pgbkt7-lam/pgadt7-t)分别共转到y2h gold感受态细胞中,涂布于ddo平板培养;

3、点板验证:分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍,然后点板到tdo/x/a和qdo/x/a固体培养基进行验证;

4、实验数据与报告整理。






水稻种子是人类重要的食物来源,其发育涉及一个复杂的调控网络,其中转录因子发挥了关键作用。mads转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子,已有的研究表明,几乎所有的水稻mads基因都在种子中表达,但对mads家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。

在这项研究中,研究组基于前期的表达谱研究基础,分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子mads29。细致分析表明,mads29在花药、胚珠和种子中均表达,且在受精后的母体组织表达量高。mads29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等,研究人---明了mads29通过调控程序化死1亡(pcd)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示,mads29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达,植物原位杂交测试服务,进而影响胚乳发育。






适用场景

1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用;

2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点;

3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白;

4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽;

5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物;

6、绘制蛋白质相互作用图谱。

酵母双杂交技术的优点

1、无需纯化蛋白;

2、检测在活1细胞内进行,可以在一定程度上代表体内的真实情况;

3、检测的结果是基因表达产物的积累效应,因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用;

4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cdna---,并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。









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