滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。
.滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
滴加sabc：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
滴加生物素化---化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。
dab显色：使用dab显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂ａ，ｂ，c各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配dab显色剂后显色。充分水洗。
.苏1木素复染，充分水洗。
酒精脱水，二甲1---透明，封片。
水稻种子是人类重要的食物来源，其发育涉及一个复杂的调控网络，其中转录因子发挥了关键作用。mads转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子，已有的研究表明，几乎所有的水稻mads基因都在种子中表达，但对mads家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。
在这项研究中，研究组基于前期的表达谱研究基础，分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子mads29。细致分析表明，mads29在花药、胚珠和种子中均表达，且在受精后的母体组织表达量高。mads29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等，研究人---明了mads29通过调控程序化死1亡(pcd)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示，mads29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达，擅长植物原位杂交的公司，进而影响胚乳发育。
原位杂交是在分子生物学领域应用---广泛的实验技术之一，是在研究生物体发育过程中的一种---重要的分子遗传学的研究方法。其英文名为insitu hybridization，其中in situ为拉丁文，字面的意思理解就是说在其原来的天然的位置处杂交。用已标记的---探针与组织切片或细胞中的待测---中的互补序列杂交， 从而对组织细胞中的---进行定性、定位和相对定量分析。是一种直接、简便的研究基因定位和表达的方法。基本原理--碱基互补配对原理
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