





目前,我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、pcr、荧光定量pcr、基因芯片和dna测序技术。显色原位杂交(chromogenicinsituhybridization,cish)技术是分子生物学、组织化学及细胞学相结合产生的一门新兴技术,是利用---分子单链间碱基互补的原理,将地1高辛或生物素标记的外源---探针与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对,植物基因组原位杂交技术服务,结合成双链杂交分子,通过---化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应将待测---在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。根据探针种类不同可分为dna原位杂交和rna原位杂交。

原位杂交第三天
1) 用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液,放置摇床上25分钟,然后用1mlmabt置换,25分钟,再用1mlmabt溶液置换,一小时以上,后用1mlmabt溶液置换,25分钟。
2) 用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次,每次放置五分钟。
3)将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul bm purple ap substrate(底物,用之前加5mm左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。
4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用pbst洗两三次后加上4%---固定,拍照。
6)4c冰箱保存。
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