





分子病理诊断,是指应用分子生物学技术,从基因水平上检测细胞和组织的分子遗传学变化,以协助病理诊断和分型、指导靶向、预测反应及判断预后的一种病理诊断技术。分子病理诊断又称分子病理检查、分子病理检测、分子病理技术。从本质上讲,凡是基于组织和细胞分子水平上的---诊断都是分子病理诊断,这是广义的分子病理诊断,如组化诊断。但目前---的是狭义的分子病理诊断,植物基因组原位杂交测试服务,即基于细胞或组织基因水平的病理诊断。

应用于分子病理诊断的dna测序技术有直接测序法和焦磷酸测序法。直接测序技术主要是sanger等发明的双脱氧链末端终止法。其原理就是根据核苷酸在某一固定的点开始,随机在某一个特定的碱基处终止,产生a、t、c、g4组不同长度的一系列核苷酸,然后在尿素变性的page胶上电泳进行检测,从而获得dna序列。直接测序法是基因突变检测的“金标准”,其优点是结果准确,重复性好,可检测整个测序范围内已知和未知突变点;缺点是步骤多,耗时长,灵敏度低,过程不易控制,在检测已知突变位点方面将逐渐被荧光定量pcr法替代。

1、组织取材:组织取材应尽可能新鲜。由于组织rna降解较快,所以新鲜组织和培养细胞在30 min 内固定。
2、细胞组织固定目的与注意事项:
(1)保持细胞结构;
(2)大限度地保持细胞内dna或rna的水平;
(3)使探针易于进入细胞或组织。
常用的固定剂是---,与其它醛类固定剂不同,---不会与蛋白质产生广泛的交叉连接,因而不会影响探针穿透入细胞或组织。

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