





在酵母双杂交系统中,bd与x蛋白融合,ad与y蛋白融合,如果x、y之间形成蛋白-蛋白复合物,ad与bd会在空间上充分接近,重新构成结构域,启动报告基因的转录。拥有bd质粒的酵母可以在某一缺陷培养基上生长,拥有ad质粒的酵母菌可以在另一种缺陷培养基上生长,通过接合(mating)或共转化使酵母同时拥有ad与bd质粒。如果bd上的目的蛋白与ad上的诱饵蛋白存在相互作用,这样的酵母可以在三缺及四缺的培养基上生长,并启动β-半乳糖苷酶基因的转录。

原位杂交第三天
1) 用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液,放置摇床上25分钟,然后用1mlmabt置换,25分钟,再用1mlmabt溶液置换,一小时以上,后用1mlmabt溶液置换,花芽原位杂交技术服务,25分钟。
2) 用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次,每次放置五分钟。
3)将胚胎转入十六孔板中,吸去staining buffer,加上300ul bm purple ap substrate(底物,用之前加5mm左旋米唑),十六孔板外面包上锡箔纸以避光,避免摇动,室温下显色。
4)每隔一小时观察胚胎是否开始显色
5)将显色完全的胚胎中的底物吸出,用pbst洗两三次后加上4%---固定,拍照。
6)4c冰箱保存。
分子病理诊断在遗传性---的诊断和分型方面---特长,通过对---染色体、基因的检测进行遗传病---和诊断,并可对家族遗传病的发生进行预测。目前,国内主要通过染色体核型分析、荧光原位杂交技术、荧光定量pcr技术等检测染色体畸形,辅助进行产前遗传性---的---。通过dna直接测序、荧光定量pcr、免1疫组化技术等检测相关基因的结构、表达的变化,辅助进行神经系统、生殖系统等遗传性---的诊断。

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