exo粒径检测-武汉科锐诺生物

外泌体分离提取方案。主要方案包括：

1、差速超1速离心法；

适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品；

2、基于peg沉淀原理的试剂盒法；

适用于血1清、脑脊液等小体积的样品；

3、超滤提取法；

适用于---培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法，做进一步的提取。

外泌体是细胞外囊泡的一种，其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似，电镜下，显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中，exo粒径检测，通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括：透射电镜（形态鉴定）、nta检测（粒径及浓度鉴定）、wb（分子标志物）。nta检测作为外泌体鉴定的---方法之一，可同时反映出检测样品的浓度及粒径。较好，纯度较高的外泌体样品，粒径分布在30-150nm，原液浓度在10^9左右。为了---检测，对每一个样品，都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日，可当天到样当天出结果。

itraq (isobarictags for relative&absolute quantitation，同位素标记相对和绝1对定量)是由ab sciex公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝1对定量技术。该技术使用8种（或4种）不同的同位素试剂来同时标记和比较8种（或4种）不同的蛋白质样品。这些试剂由3个不同的化学标签组成：报告部分，肽反应部分和平衡部分。报告部分为客户可按需选择标记个数，肽反应基团将itraq标签与肽段的n-端基团和每个赖氨酸侧链相连，可标记所有酶解肽段，平衡部位可---itraq试剂标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比，因此改变任一itraq试剂，不同同位素在标记同一多肽后在一级质谱检测，分子量都完全相同。而在串联质谱中，同重元素标记肽段平衡基团在二级质谱发生中性丢失。信号离子表现为不同质荷比的峰，因此，根据波峰的高度及面积，可以得到蛋白质的定量信息。

外泌体中包含mrna、mirna、lncrna、circrna等多种rna分子，不同类型细胞所分泌的外泌体包含的rna分子不同，这些rna分子以外泌体为载体进入靶1细胞后，会通过不同的机制对靶1细胞产生影响。通过高通量测序技术分析外泌体rna分子差异，是对外泌体rna功能研究的有效手段。

      表观生物在提取高纯度外泌体总rna分子基础上，为外泌体研究提供专1业高通量测序服务，采用全新---构建技术，可获得mrna、lncrna、circrna及mirna等丰富信息，全1面提升外泌体研究---及广度。

测序平台：illumina hiseq x10/hiseq 4000

测序模式：pe150

适用物种：人、大小鼠

 样本类型：血1清/血浆、培养基上清、尿液、唾液等

 样本分组建议：10 vs 10

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