





分子病理诊断在遗传性---的诊断和分型方面---特长,通过对---染色体、基因的检测进行遗传病---和诊断,并可对家族遗传病的发生进行预测。目前,国内主要通过染色体核型分析、荧光原位杂交技术、荧光定量pcr技术等检测染色体畸形,辅助进行产前遗传性---的---。通过dna直接测序、荧光定量pcr、免1疫组化技术等检测相关基因的结构、表达的变化,辅助进行神经系统、生殖系统等遗传性---的诊断。

阻断内源性---化物酶:滴加3%1甲1醇-h2o2,室温避光孵育15min,将玻片置于pbs(ph7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。
预杂交:滴加预杂交液,37°c孵育1h。
杂交:倾去预杂交液,滴加含探针has-circ-st6galnac6 probe 杂交液,浓度6ng/ul,恒温箱37度杂交过夜。
杂交后洗涤:洗去杂交液,2×ssc,分子病理技术服务,37°c 洗10min,1×ssc,37°c洗2×5min,0.5×ssc室温洗10min。若非特异杂交体较多,可以增加---胺洗涤。
滴加封闭液:滴加封闭血1清(正常兔血1清),室温30min。
滴加鼠抗地1高辛标记---化物酶(anti-dig-hrp):倾去封闭液,滴加anti-dig-hrp。37°c孵育50min,后pbs洗3次×5min。
原位杂交(in situ hybridization)将标记的---探针与细胞或组织中的---进行杂交,称为原位杂交。使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。rna原位---杂交又称rna原位杂交组织化学或rna原位杂交。该技术是指运用crna或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内rna表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的rna核苷酸片段,按---杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 (hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mrna、rrna和trna分子。rna原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已---出dna原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已 成为有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mrna表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。

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