武汉科锐诺生物-分子病理技术服务

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    2023-10-23

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  荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,fish)技术基本原理与显色原位杂交相同,不同之处在于fish是应用荧光素标记的探针与组织细胞中待测---反应形成杂交体,并采用荧光显微镜或激光共---显微镜观察信号表达。为了同时检测多个靶位,在荧光原位杂交技术的基础上发展起来一种新技术,即多彩色荧光原位杂交




多彩色荧光原位杂交(multicolorfluorescenceinsituhybridization,mfish)。它用几种不同颜色的荧光素单独或者混合标记的探针进行原位杂交,能同时检测多个基因,扩大了fish技术的---应用。fish技术目前主要应用于染色体和dna水平上的病理诊断检测。染色体fish主要检测染色体易位、缺失、重复、变异等;dnafish主要是检测基因突变、扩增、易位、缺失。与原位杂交技术相比,fish安全、快速,特---好、定位准确。




阻断内源性---化物酶:滴加3%1甲1醇-h2o2,室温避光孵育15min,分子病理技术服务,将玻片置于pbs(ph7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。

预杂交:滴加预杂交液,37°c孵育1h。

杂交:倾去预杂交液,滴加含探针has-circ-st6galnac6 probe 杂交液,浓度6ng/ul,恒温箱37度杂交过夜。

杂交后洗涤:洗去杂交液,2×ssc,37°c 洗10min,1×ssc,37°c洗2×5min,0.5×ssc室温洗10min。若非特异杂交体较多,可以增加---胺洗涤。

滴加封闭液:滴加封闭血1清(正常兔血1清),室温30min。

滴加鼠抗地1高辛标记---化物酶(anti-dig-hrp):倾去封闭液,滴加anti-dig-hrp。37°c孵育50min,后pbs洗3次×5min。

     




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