





荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,fish)是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料[1,2].fish的基本原理是将dna(或rna)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或dna纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特---结合来检测dna序列在染色体或dna纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.fish具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

.杂交 (1) 盛有2×ssc的塑料盘同,将干烤的滤膜飘浮在液面上,浸湿5分钟。(2) 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起,放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿,放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中,应缓缓摇动滤膜,防止它们粘在一起。(3) 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片,以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。(4) 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中,在适宜温度(即在水溶液中杂交时用68℃,花芽原位杂交测试服务,而在50%---胺中杂交时用42℃)下,预杂交1-2小时。(5) 将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟,迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间,盛滤膜的容器应盖严,以防液体蒸发。

原位杂交是在分子生物学领域应用---广泛的实验技术之一,是在研究生物体发育过程中的一种---重要的分子遗传学的研究方法。其英文名为insitu hybridization,其中in situ为拉丁文,字面的意思理解就是说在其原来的天然的位置处杂交。用已标记的---探针与组织切片或细胞中的待测---中的互补序列杂交, 从而对组织细胞中的---进行定性、定位和相对定量分析。是一种直接、简便的研究基因定位和表达的方法。基本原理--碱基互补配对原理

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