





滴加fitc-tsa:滴加fitc-tsa试剂,避光室温反应5min。后tbst洗3次×10min,pbs洗1次×5min。
dapi复染核:切片滴加dapi染液,避光孵育8min,冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。
镜检拍照:切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。(紫外激发波长330-380nm,发射波长420nm,发蓝光;fam(488)绿光激发波长465-495nm,发射波长515-555 nm,发绿光;cy3红光激发波长510-560,发射波长590nm,提供酵母双杂交技术服务,发红光。)
tunel流式细胞凋亡检测服务通常称为细胞程序性死1亡,是由基因控制的主动性细胞死1亡过程。越来越多数据发现,细胞凋亡与多种---密切相关,如癌细胞具有连续增殖、抵抗细胞凋亡能力,利用流式细胞仪分析细胞凋亡可为肿1瘤诊断,疗1效评价和预后预测提供了重要的参考指标。
tunel(tdt-mediated dutp nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核dna的断裂情况,其原理是生物素biotinylate标记的dutp在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(tdt enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂dna的3’-oh末端,并与连接辣根---化酶(hrp,horse-radish peroxidase)的链霉亲和素streptavidin特---结合,后者又与pod底物h2o2、二氨1基联1---1胺(dab)产生深棕色反应,特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在光学显微镜下即---察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有dna断裂,因而没有3‘-oh形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿1瘤药的药1效评价,以及通过双色法确定细胞类型和分化阶段。
荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,fish)是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料[1,2].fish的基本原理是将dna(或rna)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或dna纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特---结合来检测dna序列在染色体或dna纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.fish具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

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