





荧光原位杂交(fluorescenceinsituhybridization,fish)技术基本原理与显色原位杂交相同,不同之处在于fish是应用荧光素标记的探针与组织细胞中待测---反应形成杂交体,并采用荧光显微镜或激光共---显微镜观察信号表达。为了同时检测多个靶位,在荧光原位杂交技术的基础上发展起来一种新技术,即多彩色荧光原位杂交

水稻种子是人类重要的食物来源,其发育涉及一个复杂的调控网络,其中转录因子发挥了关键作用。mads转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子,已有的研究表明,几乎所有的水稻mads基因都在种子中表达,但对mads家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。
在这项研究中,研究组基于前期的表达谱研究基础,分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子mads29。细致分析表明,mads29在花药、胚珠和种子中均表达,且在受精后的母体组织表达量高。mads29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等,研究人---明了mads29通过调控程序化死1亡(pcd)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示,mads29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达,进而影响胚乳发育。

原位杂交(in situ hybridization)将标记的---探针与细胞或组织中的---进行杂交,植物组织rna原位杂交检测技术服务,称为原位杂交。使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。rna原位---杂交又称rna原位杂交组织化学或rna原位杂交。该技术是指运用crna或寡核苷酸等探针检测细胞和组织内rna表达的一种原位杂交技术。其基本原理是:在细胞或组织结构保持不变的条件下,用标记的已知的rna核苷酸片段,按---杂交中碱基配对原则,与待测细胞或组织中相应的基因片段相结合(杂交),所形成的杂交体 (hybrids)经显色反应后在光学显微镜或电子显微镜下观察其细胞内相应的mrna、rrna和trna分子。rna原位杂交技术 经不断改进,其应用的领域已---出dna原位杂交技术。尤其在基因分析和诊断方面能作定性、定位和定量分析,已 成为有效的分子病理学技术,同时在分析低丰度和罕见的mrna表达方面已展示了分子生物学的一重要方向。

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