





癌组织原位杂交实验步骤:
1. 将准备做原位杂交的样本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2. 玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或apes。
3. 石蜡切片经常规脱蜡至水。30%h2o2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4. 暴露mrna---片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温---3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。原位杂交用pbs洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

意义
在研究dna分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成dna-dna、dna-rna或 rna-rna 双键分子的特点,应用带有标记的(有性同位素,如3h、35s、32p、荧光素生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针,与组织切片或细胞内待测---(rna或dna)片段进行杂交,然后可用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的 mrna或dna 的存在并定位;用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有---的敏感性和特---,分子病理技术服务,可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
适用场景
1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用;
2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点;
3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白;
4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽;
5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物;
6、绘制蛋白质相互作用图谱。
酵母双杂交技术的优点
1、无需纯化蛋白;
2、检测在活1细胞内进行,可以在一定程度上代表体内的真实情况;
3、检测的结果是基因表达产物的积累效应,因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用;
4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cdna---,并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。

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