科锐诺生物科技-rna原位杂交测试服务

点对点酵母双杂交验证实验流程

1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测；

2、共转化：分别将诱饵/捕获质粒（pgbkt7-bait/pgadt7-prey）、阳性对照质粒（pgbkt7-p53/pgadt7-t）、阴性对照质粒（pgbkt7-lam/pgadt7-t）分别共转到y2h gold感受态细胞中，涂布于ddo平板培养；

3、点板验证：分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍，rna原位杂交测试服务，然后点板到tdo/x/a和qdo/x/a固体培养基进行验证；

4、实验数据与报告整理。

 滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。

  .滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

滴加sabc：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

滴加生物素化---化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。

dab显色：使用dab显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂ａ，ｂ，c各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配dab显色剂后显色。充分水洗。

.苏1木素复染，充分水洗。

酒精脱水，二甲1---透明，封片。