癌组织原位杂交实验步骤：
1. 将准备做原位杂交的样本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2. 玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或apes。
3. 石蜡切片经常规脱蜡至水。30%h2o2 1份+蒸馏水10份混合，室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4. 暴露mrna---片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶（1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀），37℃或室温---3--30分钟（视标本新旧、厚薄自行调整）。原位杂交用pbs洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
后固定：胃蛋白酶---后才需要。固定液为1%---/0.1 m pbs（ph7.2-7.6），含有1/1000 depc。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
原位杂交的预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×ssc洗涤5分钟×2次；37℃0.5×ssc洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×ssc洗涤15分钟×1次(如果有非特---染色，rna原位杂交技术服务，重复0.2×ssc洗涤15分钟×1-2次)。
分子病理检测的意义：
通过分子检测协助病理诊断
某些肿1瘤具有特定的分子病理学改变，对于病理常规染色难于诊断的这些肿1瘤，进行分子病理检测可协助得出准确的病理诊断。例如淋巴1瘤的鉴别诊断往往依赖于形态和免1疫组化的综合判断，但有些时候，这些手段也不能满足诊断的需要，这时我们通过ig或tcr基因重排检测，可协助鉴别淋巴细胞的普通增殖和肿1瘤性增殖。
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