





分子病理学诊断主要应用于以下几个方面:1、对于肿l瘤---的检测,对于肿l瘤高危人群的筛检具有实用价值,如检测gstπ基因以判定个体暴露于---物是的---危险性。2、肿l瘤相关---的检测,如采用原位杂交方法检测标本中hpv、eber等---。3、疑难肿l瘤的诊断和分类,尤其在鉴别诊断淋巴细胞增l生性---与淋巴细胞性肿l瘤上有着---的特---和---性。4、肿l瘤的个体化治l疗,能够根据肿l瘤发生l发展不同阶段分子水平的特点,对肿l瘤的个体化和预见性治l疗具有指导意义。5、肿l瘤的预后判断,如采用荧光原位杂交技术(fish)检测her-2基因在乳l腺l癌---中的表达情况,配合术后治l疗,指导---用药选择。

荧光原位杂交技(fish)原理:是利用荧光标记的特异---探针与细胞内相应的靶dna分子或rna分子杂交,通过在荧光显微镜或共---激光扫描仪下观察荧光信号,来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,或者是结合了荧光探针的dna区域或rna分子在染色体或其他细胞器中的定位。
荧光原位杂交技(fish)实验步骤:
1、组织固定:组织取出洗净后立即放入固定液(depc水配制)中固定2-12h。
2、脱水:组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡,包埋。
3、切片:石蜡经切片机切片,摊片机捞片,62°烤箱烤片2h。
4、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲1---ⅰ 15min-二甲1---ⅱ 15min-无水---ⅰ 5min-无水---ⅱ 5min,风干,depc水浸泡。
5、---:根据组织固定时间长短,切片于修复液中煮沸10分钟,自然冷却。后基因笔画圈,分子病理技术服务,根据不同组织不同指标特性,滴加蛋白酶k(20ug/ml) 37°---20min。纯水冲洗后pbs洗3次×5min。

点对点酵母双杂交验证实验流程
1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测;
2、共转化:分别将诱饵/捕获质粒(pgbkt7-bait/pgadt7-prey)、阳性对照质粒(pgbkt7-p53/pgadt7-t)、阴性对照质粒(pgbkt7-lam/pgadt7-t)分别共转到y2h gold感受态细胞中,涂布于ddo平板培养;
3、点板验证:分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍,然后点板到tdo/x/a和qdo/x/a固体培养基进行验证;
4、实验数据与报告整理。

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