植物组织原位杂交检测服务-科锐诺

tunel流式细胞凋亡检测服务通常称为细胞程序性死1亡，是由基因控制的主动性细胞死1亡过程。越来越多数据发现，细胞凋亡与多种---密切相关，如癌细胞具有连续增殖、抵抗细胞凋亡能力，利用流式细胞仪分析细胞凋亡可为肿1瘤诊断，疗1效评价和预后预测提供了重要的参考指标。

　　tunel（tdt-mediated dutp nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核dna的断裂情况，其原理是生物素biotinylate标记的dutp在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（tdt enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂dna的3’-oh末端，并与连接辣根---化酶（hrp，horse-radish peroxidase）的链霉亲和素streptavidin特---结合，后者又与pod底物h2o2、二氨1基联1---1胺（dab）产生深棕色反应，特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即---察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有dna断裂，因而没有3‘-oh形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿1瘤药的药1效评价，以及通过双色法确定细胞类型和分化阶段。

原位杂交第三天

1） 用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlmabt置换，25分钟，再用1mlmabt溶液置换，一小时以上，后用1mlmabt溶液置换，植物组织原位杂交检测服务，25分钟。

2） 用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，加上300ul bm purple ap substrate（底物，用之前加5mm左旋米唑），十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用pbst洗两三次后加上4%---固定，拍照。

6）4c冰箱保存。

应用于分子病理诊断的dna测序技术有直接测序法和焦磷酸测序法。直接测序技术主要是sanger等发明的双脱氧链末端终止法。其原理就是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生a、t、c、g4组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的page胶上电泳进行检测，从而获得dna序列。直接测序法是基因突变检测的“金标准”，其优点是结果准确，重复性好，可检测整个测序范围内已知和未知突变点;缺点是步骤多，耗时长，灵敏度低，过程不易控制，在检测已知突变位点方面将逐渐被荧光定量pcｒ法替代。





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