科锐诺-擅长植物原位杂交的公司

原位杂交第三天

1） 用1ml含10%热灭清的mabt溶液置换溶液，放置摇床上25分钟，然后用1mlmabt置换，25分钟，再用1mlmabt溶液置换，一小时以上，后用1mlmabt溶液置换，25分钟。

2） 用1ml 1mm左旋米睉的staining buffer洗三次，每次放置五分钟。

3）将胚胎转入十六孔板中，吸去staining buffer，擅长植物原位杂交的公司，加上300ul bm purple ap substrate（底物，用之前加5mm左旋米唑），十六孔板外面包上锡箔纸以避光，避免摇动，室温下显色。

4）每隔一小时观察胚胎是否开始显色

5）将显色完全的胚胎中的底物吸出，用pbst洗两三次后加上4%---固定，拍照。

6）4c冰箱保存。

应用于分子病理诊断的dna测序技术有直接测序法和焦磷酸测序法。直接测序技术主要是sanger等发明的双脱氧链末端终止法。其原理就是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生a、t、c、g4组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的page胶上电泳进行检测，从而获得dna序列。直接测序法是基因突变检测的“金标准”，其优点是结果准确，重复性好，可检测整个测序范围内已知和未知突变点;缺点是步骤多，耗时长，灵敏度低，过程不易控制，在检测已知突变位点方面将逐渐被荧光定量pcｒ法替代。

滴加fitc-tsa：滴加fitc-tsa试剂，避光室温反应5min。后tbst洗3次×10min，pbs洗1次×5min。

dapi复染核：切片滴加dapi染液，避光孵育8min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。

镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。（紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；fam(488)绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光；cy3红光激发波长510-560，发射波长590nm，发红光。）

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