分子病理技术服务-科锐诺

阻断内源性---化物酶：滴加3%1甲1醇-h2o2，室温避光孵育15min，将玻片置于pbs（ph7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

预杂交：滴加预杂交液，37°c孵育1h。

杂交：倾去预杂交液，滴加含探针has-circ-st6galnac6 probe 杂交液，浓度6ng/ul，恒温箱37度杂交过夜。

杂交后洗涤：洗去杂交液，2×ssc，37°c 洗10min，1×ssc，37°c洗2×5min，分子病理技术服务，0.5×ssc室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加---胺洗涤。

滴加封闭液：滴加封闭血1清（正常兔血1清），室温30min。

滴加鼠抗地1高辛标记---化物酶（anti-dig-hrp）：倾去封闭液，滴加anti-dig-hrp。37°c孵育50min，后pbs洗3次×5min。

目前，我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、pcr、荧光定量pcr、基因芯片和dna测序技术。显色原位杂交(chromogenicinsituhybridization，cish)技术是分子生物学、组织化学及细胞学相结合产生的一门新兴技术，是利用---分子单链间碱基互补的原理，将地1高辛或生物素标记的外源---探针与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对，结合成双链杂交分子，通过---化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应将待测---在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。根据探针种类不同可分为dna原位杂交和rna原位杂交。




pcr技术是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异dna或dn---段的方法。其原理是设计特异引物，在taqdna聚合酶催化作用下，经过高温变性、低温退火和适温延伸3个步骤反复循环，对某一特定模板的特定区域进行扩增，反应结束后应用凝胶电泳或测序等方法分析产物。因此，该技术可以直接检测---组织、细胞中是否存在某种---dna，同时pcr技术还是基因突变检测的前期---技术。




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