





原位杂交(in situ hybridization)将标记的---探针与细胞或组织中的---进行杂交,称为原位杂交,使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在---或其他真核细胞中的位置。
原位杂交技术的基本原理是利用---分子单链之间有互补的碱基序列,将有放1射性或非放1射性的外源---(即探针)与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对,结合成专一的---杂交分子,经一定的检测手段将待测---在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。为显示特定的---序列必须具备3个重要条件:组织、细胞或染色体的固定、具有能与特定片段互补的核苷酸序列(即探针)、有与探针结合的标记物
后固定:胃蛋白酶---后才需要。固定液为1%---/0.1 m pbs(ph7.2-7.6),含有1/1000 depc。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
原位杂交的预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专1用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×ssc洗涤5分钟×2次;37℃0.5×ssc洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×ssc洗涤15分钟×1次(如果有非特---染色,重复0.2×ssc洗涤15分钟×1-2次)。
原理
原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的---复性结合而使得组织细胞中的特------得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在---的原有位置上显示出来。
经特定标记的核苷酸链为探针,植物组织原位杂交技术服务,可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检dn---段或mrna进行杂交,然后显示标记物,从而分析待检---的分布和含量。利用此项技术可研究各种基因在染色体上的定位,编码某种蛋白质的mrna在胞质中的表达。

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