癌组织原位杂交实验步骤：
1. 将准备做原位杂交的样本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2. 玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或apes。
3. 石蜡切片经常规脱蜡至水。30%h2o2 1份+蒸馏水10份混合，室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4. 暴露mrna---片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶（1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀），花芽原位杂交测试服务，37℃或室温---3--30分钟（视标本新旧、厚薄自行调整）。原位杂交用pbs洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
水稻种子是人类重要的食物来源，其发育涉及一个复杂的调控网络，其中转录因子发挥了关键作用。mads转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子，已有的研究表明，几乎所有的水稻mads基因都在种子中表达，但对mads家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。
在这项研究中，研究组基于前期的表达谱研究基础，分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子mads29。细致分析表明，mads29在花药、胚珠和种子中均表达，且在受精后的母体组织表达量高。mads29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等，研究人---明了mads29通过调控程序化死1亡(pcd)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示，mads29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达，进而影响胚乳发育。
fish是原位杂交技术大家族中的一员，因其所用探针被荧光物质标记（间接或直接）而得名，该方法在80年代末 被发明，现已从实验室逐步进入---诊断领域。基本原理是荧光标记的---探针在变性后与已变性的靶---在退火 温度下复性；通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象（即维持其原位）的前提下对靶---进行分析。dna荧光标记探针是其中常用的一类---探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的dna进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染，灵敏度能得到保障，可进行多色观察分析，因而可同时使用多个探针，缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。
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