科锐诺生物-植物原位杂交测试服务

结1核病是---威胁人类健康的传1染性---，每年约有200万人死于该病，其死1亡率在传1染性---中仅低于艾1滋病，随着医1疗诊断技术的迅猛发展，植物原位杂交测试服务，结1核病病理诊断经历了单一形态学和联合特殊染色，到如今利用分子病理---技术进行准---断的三个阶段。

　　我科早在全1国建立了系统性结1核病分子病理诊断技术的平台，率1先将分子病理诊断技术在结1核病中应用并推广，解决了传统病理对菌阴肺结1核及肺外结1核病的诊断率低、结1核病与非结1核分枝杆1菌病无法鉴别以及耐药结1核病无法诊断等难题。同时，我科作为中华医学会结1核病学分会金1牌病理培训基地，负责组织制定了结1核病病理诊断规范、培训了大量的专1业---，为形成结1核病病理学综合诊治新模式做出了卓1越贡献!

原位杂交天

1. 重新水化和固定

1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的pbst溶液，放置5分钟。

2） 置换成30%的pbst溶液，放置5分钟

3） 置换成pbst溶液，放置5分钟，重复一次

4） 置换成4%---的pbs溶液固定20分钟5） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。

蛋白酶处理与后固定（本实验不做此步）

1） 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理，5体节到24小时的胚胎处理3分钟，24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶处理，发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织，以便于杂交。

2） 用pbst溶液轻洗，在pbst中放置5分钟。

3） 用4%---的pbs溶液固定20分钟，室温。

4） 用pbst洗两次，每次放置五分钟，室温。

2. 预杂交

1）每个管中置换成大约300ulhyb－溶液，60℃水浴5分钟，避免振荡。

2）用等体积的hyb+取代hyb－。

3）60℃水浴，预杂交4小时以上。

3. 杂交

1）吸去预杂交的hyb+，加上100ul已加入探针的hyb+溶液（探针浓度约为1ng/ul）..

2）60℃ 温浴过夜。注：杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等，温度越低，探针结合越好，温度越高，背景越小。