将少数菌落转移到纤维素滤膜上
（1） 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。
（2） 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上，再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种（或打点）。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后，在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。
（3） 倒置平板，于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。
（4） 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂，在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。
（5） 用parafilm膜封好主平板，倒置贮放于4℃，直至获得杂交反应的结果。
（6） 裂解---，按本段下面所述方法，使释放的dna结合于纤维素滤膜。
原位杂交第二天
1.
1）将探针回收，放于－20c保存（通常探针可重复使用十次左右）。
2）加入50%---胺/2xssct溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。
3）置换2xssct1ml，60℃，放置15分钟。
4）置换0.2xssct1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。
2.
1）用mabt洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。
2）室温下加1ml 1：2：7溶液，分子病理技术服务，时间为一小时。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4c 冰箱过夜。
点对点酵母双杂交验证实验流程
1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测；
2、共转化：分别将诱饵/捕获质粒（pgbkt7-bait/pgadt7-prey）、阳性对照质粒（pgbkt7-p53/pgadt7-t）、阴性对照质粒（pgbkt7-lam/pgadt7-t）分别共转到y2h gold感受态细胞中，涂布于ddo平板培养；
3、点板验证：分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍，然后点板到tdo/x/a和qdo/x/a固体培养基进行验证；
4、实验数据与报告整理。
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