tunel检测技术服务-科锐诺生物

原位杂交第二天

1.

1）将探针回收，放于－20c保存（通常探针可重复使用十次左右）。

2）加入50%---胺/2xssct溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。

3）置换2xssct1ml，60℃，放置15分钟。

4）置换0.2xssct1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。

2.

1）用mabt洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。

2）室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。

3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，4c 冰箱过夜。

   在酵母双杂交系统中，bd与x蛋白融合，ad与y蛋白融合，如果x、y之间形成蛋白-蛋白复合物，ad与bd会在空间上充分接近，重新构成结构域，tunel检测技术服务，启动报告基因的转录。拥有bd质粒的酵母可以在某一缺陷培养基上生长，拥有ad质粒的酵母菌可以在另一种缺陷培养基上生长，通过接合（mating）或共转化使酵母同时拥有ad与bd质粒。如果bd上的目的蛋白与ad上的诱饵蛋白存在相互作用，这样的酵母可以在三缺及四缺的培养基上生长，并启动β-半乳糖苷酶基因的转录。