植物组织rna原位杂交检测服务-武汉科锐诺生物

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    2024-2-27

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水稻种子是人类重要的食物来源,其发育涉及一个复杂的调控网络,其中转录因子发挥了关键作用。mads转录因子家族成员是植物花器1官发育的重要调控因子,已有的研究表明,几乎所有的水稻mads基因都在种子中表达,但对mads家族成员参与水稻种子发育调控的研究结果仍比较少。

在这项研究中,研究组基于前期的表达谱研究基础,分析得到了一个在水稻生殖发育阶段优先表达的转录因子mads29。细致分析表明,mads29在花药、胚珠和种子中均表达,且在受精后的母体组织表达量高。mads29的反义转1基因植株呈现种子皱缩、淀粉粒形态异常、灌浆速率下降等表型。通过解剖学切片、末端转移酶标记实验和全基因组表达谱芯片分析等,研究人---明了mads29通过调控程序化死1亡(pcd)过程促进珠心细胞和珠心突起处的降解。进一步的体外凝胶阻滞实验显示,mads29能够通过直接结合程序化死1亡相关基因的启动子区域而调控其表达,进而影响胚乳发育。






fish是原位杂交技术大家族中的一员,因其所用探针被荧光物质标记(间接或直接)而得名,该方法在80年代末 被发明,现已从实验室逐步进入---诊断领域。基本原理是荧光标记的---探针在变性后与已变性的靶---在退火 温度下复性;通过荧光显微镜观察荧光信号可在不改变被分析对象(即维持其原位)的前提下对靶---进行分析。dna荧光标记探针是其中常用的一类---探针。利用此探针可对组织、细胞或染色体中的dna进行染色体及基因水平 的分析。荧光标记探针不对环境构成污染,灵敏度能得到保障,可进行多色观察分析,因而可同时使用多个探针,缩 短因单个探针分开使用导致的周期过程和技术障碍。




原位杂交第二天

1.

1)将探针回收,放于-20c保存(通常探针可重复使用十次左右)。

2)加入50%---胺/2xssct溶液1毫升,60℃,放置30分钟,重复一次。

3)置换2xssct1ml,60℃,放置15分钟。

4)置换0.2xssct1ml,60℃,放置30分钟,重复一次。

2.

1)用mabt洗两次,植物组织rna原位杂交检测服务,每次五分钟,放在摇床轻轻摇动。

2)室温下加1ml 1:2:7溶液,时间为一小时。

3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶连,4c 冰箱过夜。




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