武汉科锐诺生物-酵母双杂交技术服务公司

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    2024-2-27

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点对点酵母双杂交验证实验流程

1、诱饵蛋白毒性及自激1活检测;

2、共转化:分别将诱饵/捕获质粒(pgbkt7-bait/pgadt7-prey)、阳性对照质粒(pgbkt7-p53/pgadt7-t)、阴性对照质粒(pgbkt7-lam/pgadt7-t)分别共转到y2h gold感受态细胞中,涂布于ddo平板培养;

3、点板验证:分别从平板上挑单克1隆稀释10倍、100倍、1000倍,然后点板到tdo/x/a和qdo/x/a固体培养基进行验证;

4、实验数据与报告整理。






适用场景

1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用;

2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点;

3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白;

4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽;

5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物;

6、绘制蛋白质相互作用图谱。

酵母双杂交技术的优点

1、无需纯化蛋白;

2、检测在活1细胞内进行,可以在一定程度上代表体内的真实情况;

3、检测的结果是基因表达产物的积累效应,因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用;

4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cdna---,酵母双杂交技术服务公司,并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。










癌组织原位杂交实验步骤:

       1. 将准备做原位杂交的样本常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。

       2. 玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或apes。

       3. 石蜡切片经常规脱蜡至水。30%h2o2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

       4. 暴露mrna---片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温---3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。原位杂交用pbs洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。







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