





原位杂交天
1. 重新水化和固定
1) 吸取固定好的胚胎,加入50%的pbst溶液,放置5分钟。
2) 置换成30%的pbst溶液,放置5分钟
3) 置换成pbst溶液,放置5分钟,重复一次
4) 置换成4%---的pbs溶液固定20分钟5) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
蛋白酶处理与后固定(本实验不做此步)
1) 用10ul/ml的蛋白酶k在室温下处理胚胎。5体节以下的胚胎不处理,5体节到24小时的胚胎处理3分钟,24小时以上的胚胎处理5分钟或者更长。发育时间越短的胚胎越嫩,可以不用或者少用蛋白酶处理,发育时间长的胚胎就需要用蛋白酶来疏松组织,以便于杂交。
2) 用pbst溶液轻洗,在pbst中放置5分钟。
3) 用4%---的pbs溶液固定20分钟,室温。
4) 用pbst洗两次,每次放置五分钟,室温。
2. 预杂交
1)每个管中置换成大约300ulhyb-溶液,60℃水浴5分钟,避免振荡。
2)用等体积的hyb+取代hyb-。
3)60℃水浴,预杂交4小时以上。
3. 杂交
1)吸去预杂交的hyb+,加上100ul已加入探针的hyb+溶液(探针浓度约为1ng/ul)..
2)60℃ 温浴过夜。注:杂交与预杂交的温度可以是55到60度不等,温度越低,探针结合越好,rna原位杂交检测服务,温度越高,背景越小。
分子病理应用的检测样本主要包括石蜡组织、新鲜组织、脱落细胞、全血及其他---等。石蜡切片标本厚度应在4-6μm,切片数量依据组织大小而定。样本对检测结果和分析---,病理---需要对可评估的样本进一步明确病理诊断,并评价标本有无出血、坏死和不利于---的前处理(例如含hcl脱钙液处理),病变细胞(如细胞)的总量和比例,避免假阴性。进行ngs检测前需通过病理诊断明确其的性质及含量,根据不同类型选择合适的基因panel测序。组织标本中细胞含量建议达到20%以上,低于此标准可富集后检测。未经病理评估的---结果不可单独用于分子病理---诊断目的。

分子病理学是20世纪70年代初,随着---的细胞生物学和分子生物学的发展和相互渗透的一个病理学分支学科。分子病理学是应用分子生物学理论、技术和方法,研究---发生1发展过程中蛋白质和---水平变化对---发生过程的影响及其作用,探讨---发生的分子机制,揭示---本质的现代病理学的分支学科。深入进行---分子病理学研究,将为---的精1准诊断和精1准治1疗提供重要的科学依据。

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