





原理
原位杂交技术是在一定的温度和离子浓度下,使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的---复性结合而使得组织细胞中的特------得到定位,并通过探针上所标记的检测系统将其在---的原有位置上显示出来。
经特定标记的核苷酸链为探针,植物基因组原位杂交技术服务,可与组织切片、细胞或染色体标本中的待检dn---段或mrna进行杂交,然后显示标记物,从而分析待检---的分布和含量。利用此项技术可研究各种基因在染色体上的定位,编码某种蛋白质的mrna在胞质中的表达。

杂交结束后,去除杂交液,立即于室温把滤膜放入大体积(300-500ml)的2×ssc和0.1% sds溶液中,轻轻振摇5分钟,并将滤膜至少翻转一次。重复洗 一次,同时应避免膜干涸。
68℃用300-500ml 1×ssc和0.1% sds溶液洗膜两次,每次1-1.5小时。此时已可进行自显影。如背景---或实验要求严格的洗膜条件,可用300-500ml 0.2×ssc和0.1% sds的溶液于68℃将滤膜浸泡60分钟。
把滤膜放在纸巾上于室温晾干后,把滤膜(编号面朝上)放在一张保鲜膜上,并在保鲜膜上作几个不对称的标记,以使滤膜与性自显影片位置对应。
用第二张保鲜膜盖住滤膜。加x片并加上增感屏于-70℃---12-16小时。
底片显---,在底片上贴一张透明硬纸片。在纸上标记阳性杂交信号的位置,同时在不对称分布点的位置上作出标记。可从底片上取下透明纸,通过对比纸上的点与琼脂上的点来鉴定阳性菌落。
分子病理应用的检测样本主要包括石蜡组织、新鲜组织、脱落细胞、全血及其他---等。石蜡切片标本厚度应在4-6μm,切片数量依据组织大小而定。样本对检测结果和分析---,病理---需要对可评估的样本进一步明确病理诊断,并评价标本有无出血、坏死和不利于---的前处理(例如含hcl脱钙液处理),病变细胞(如细胞)的总量和比例,避免假阴性。进行ngs检测前需通过病理诊断明确其的性质及含量,根据不同类型选择合适的基因panel测序。组织标本中细胞含量建议达到20%以上,低于此标准可富集后检测。未经病理评估的---结果不可单独用于分子病理---诊断目的。

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