





外泌体分离提取方案。主要方案包括:
1、差速超1速离心法;
适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;
2、基于peg沉淀原理的试剂盒法;
适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;
3、超滤提取法;
适用于---培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。
外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、nta检测(粒径及浓度鉴定)、wb(分子标志物)。nta检测作为外泌体鉴定的---方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了---检测,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。

外泌体研究开展的如火如荼。不论是 sci 文章的发表还是各类基1金的申请,外泌体相关研究表现都非常亮眼。外泌体提取后,外泌体电镜服务,研究人员面临的一个重要问题就是,我提取的是不是外泌体?如果是的话,如何?
现阶段,对外泌体进行鉴定主要有三种主流的方法:电镜、粒径和 western blot 分析靶标物。之前我们已经对外泌体电镜进行了总结,今天我们来看看外泌体的粒径分析。
外泌体粒径分析原理
外泌体粒径分析方法为纳米颗粒---分析(nanoparticle tracking ---ysis, nt a),其原理是对每个颗粒的布朗运动进行追1踪和分析,结合 stockes-einstein 方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度。nt a技术已被外泌体研究领域---为外泌体表征手段之一。相较于其他表征方式,nt a技术的样本处理更简单、更能---外泌体原始状态、检测速度更快。
抗原提呈中外泌体的作用
树突状细胞是免1疫系统中分泌外泌体活跃的细胞。树突状细胞是抗原提呈细胞的一种,能通过吞噬入1侵体内的---等异物,在切断抗原肽后,与 mhcⅱ类分子结合并提呈在细胞表面来激1活t细胞。细胞内的抗原肽利用mhcⅰ类分子提呈,树突状细胞分泌的外泌体携带mhcⅰ类和ⅱ类分子,它们分别与抗原特---cd8+ 细胞---性t细胞、cd4+ 辅助t细胞的t细胞受体结合,在远离树突状细胞处也可以激1活t细胞。
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