科锐诺生物科技-染色体原位杂交经验的公司

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，染色体原位杂交经验的公司，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。

目前，我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、pcr、荧光定量pcr、基因芯片和dna测序技术。显色原位杂交(chromogenicinsituhybridization，cish)技术是分子生物学、组织化学及细胞学相结合产生的一门新兴技术，是利用---分子单链间碱基互补的原理，将地1高辛或生物素标记的外源---探针与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对，结合成双链杂交分子，通过---化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应将待测---在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。根据探针种类不同可分为dna原位杂交和rna原位杂交。




目前，我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、pcr、荧光定量pcr、基因芯片和dna测序技术dna原位杂交主要用于基因定位、特异基因(如病原微生物基因)检测等;rna原位杂交则用于基因表达检测。原位杂交技术的优点是操作简单，可直接定位组织，价格低廉，信号稳定，储存方便，可做组织学评价，是目前应用较多的分子病理技术之一。




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