植物染色体原位杂交测试服务-科锐诺

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。

荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization，fish）是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术，以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法，探针首先与某种介导分子（reporter molecule）结合，杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料[1，植物染色体原位杂交测试服务，2].fish的基本原理是将dna（或rna）探针用特殊的核苷酸分子标记，然后将探针直接杂交到染色体或dna纤维切片上，再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特---结合来检测dna序列在染色体或dna纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.fish具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点，不但能显示中期分裂相，还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

1、组织取材：组织取材应尽可能新鲜。由于组织rna降解较快，所以新鲜组织和培养细胞在30 min 内固定。

       2、细胞组织固定目的与注意事项：

       （1）保持细胞结构；

       （2）大限度地保持细胞内dna或rna的水平；

       （3）使探针易于进入细胞或组织。

        常用的固定剂是---，与其它醛类固定剂不同，---不会与蛋白质产生广泛的交叉连接，因而不会影响探针穿透入细胞或组织。

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