酵母双杂交技术服务找-科锐诺

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。

pcr技术是一种在生物体细胞外通过酶促合成特异dna或dn---段的方法。其原理是设计特异引物，在taqdna聚合酶催化作用下，经过高温变性、低温退火和适温延伸3个步骤反复循环，对某一特定模板的特定区域进行扩增，反应结束后应用凝胶电泳或测序等方法分析产物。因此，该技术可以直接检测---组织、细胞中是否存在某种---dna，同时pcr技术还是基因突变检测的前期---技术。

原位杂交的应用范围：

细胞特---mrna转录的定位，可用于基因图谱，基因表达和基因组进化的研究；

感1染组织中---dna/rna的检测和定位，如eb---mrna、人类乳1头状瘤1---和巨细胞---dna的检测；

癌基因、抑癌基因及各种功能基因在转录水平的表达及其变化的检测；

基因在染色体上的定位；

检测染色体的变化，酵母双杂交技术服务找，如染色体数量异常和染色体易位等；

分裂间期细胞遗传学的研究，如遗传病的产前诊断和某些遗传病基因携带者的确定，某些肿1瘤的诊断和生物学剂量测定等。

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