武汉科锐诺生物-植物染色体压片技术服务

   在酵母双杂交系统中，bd与x蛋白融合，ad与y蛋白融合，如果x、y之间形成蛋白-蛋白复合物，ad与bd会在空间上充分接近，重新构成结构域，启动报告基因的转录。拥有bd质粒的酵母可以在某一缺陷培养基上生长，拥有ad质粒的酵母菌可以在另一种缺陷培养基上生长，通过接合（mating）或共转化使酵母同时拥有ad与bd质粒。如果bd上的目的蛋白与ad上的诱饵蛋白存在相互作用，这样的酵母可以在三缺及四缺的培养基上生长，并启动β-半乳糖苷酶基因的转录。

阻断内源性---化物酶：滴加3%1甲1醇-h2o2，室温避光孵育15min，将玻片置于pbs（ph7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5min。

预杂交：滴加预杂交液，37°c孵育1h。

杂交：倾去预杂交液，滴加含探针has-circ-st6galnac6 probe 杂交液，浓度6ng/ul，恒温箱37度杂交过夜。

杂交后洗涤：洗去杂交液，2×ssc，植物染色体压片技术服务，37°c 洗10min，1×ssc，37°c洗2×5min，0.5×ssc室温洗10min。若非特异杂交体较多，可以增加---胺洗涤。

滴加封闭液：滴加封闭血1清（正常兔血1清），室温30min。

滴加鼠抗地1高辛标记---化物酶（anti-dig-hrp）：倾去封闭液，滴加anti-dig-hrp。37°c孵育50min，后pbs洗3次×5min。