外泌体电镜检测-武汉科锐诺生物

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    2024-5-6

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itraq (isobarictags for relative&absolute quantitation,外泌体电镜检测,同位素标记相对和绝1对定量)是由ab sciex公司研发的一种体外同重同位素标记的相对与绝1对定量技术。该技术使用8种(或4种)不同的同位素试剂来同时标记和比较8种(或4种)不同的蛋白质样品。这些试剂由3个不同的化学标签组成:报告部分,肽反应部分和平衡部分。报告部分为客户可按需选择标记个数,肽反应基团将itraq标签与肽段的n-端基团和每个赖氨酸侧链相连,可标记所有酶解肽段,平衡部位可---itraq试剂标记的不同样本的同一肽段具有相同的质荷比,因此改变任一itraq试剂,不同同位素在标记同一多肽后在一级质谱检测,分子量都完全相同。而在串联质谱中,同重元素标记肽段平衡基团在二级质谱发生中性丢失。信号离子表现为不同质荷比的峰,因此,根据波峰的高度及面积,可以得到蛋白质的定量信息。




细胞囊泡分泌的外泌体保留了天然外泌体的形态和结构特征,其靶向性和个性化能力优于天然外泌体。进化后的外泌体表面携带更多的蛋白质因子,具有---的靶向识别功能。其次,外泌物擅长智能修复,能迅速覆盖问题皮肤,激1活自体细胞的修复能力。同时,阅读细胞记忆和基因记忆,智能调节各种细胞的再生和更新,---现有细胞的生长和功能,---活跃的皮肤循环生态。







外泌体分离提取方案。主要方案包括:

1、差速超1速离心法;

适用于细胞上清、灌洗液、尿液等大体积的样品;

2、基于peg沉淀原理的试剂盒法;

适用于血1清、脑脊液等小体积的样品;

3、超滤提取法;

适用于---培养液或外泌体含量较低的样品浓缩。亦可搭配超1速离心法,做进一步的提取。


外泌体是细胞外囊泡的一种,其膜来源与粒径范围与细胞外囊泡相似,电镜下,显示出典型的茶托状超微结构。实际操作中,通过常规的单一的方法很难鉴定外泌体。鉴定外泌体需要包含形态、粒径、表面分子标记物等多方面的鉴定。具体方法包括:透射电镜(形态鉴定)、nta检测(粒径及浓度鉴定)、wb(分子标志物)。nta检测作为外泌体鉴定的---方法之一,可同时反映出检测样品的浓度及粒径。较好,纯度较高的外泌体样品,粒径分布在30-150nm,原液浓度在10^9左右。为了---检测,对每一个样品,都会进行3次技术重复。检测周期为2-3个工作日,可当天到样当天出结果。








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