原位杂交杂交液注意事项：
（1）杂交液内除含一定浓度的标记探针外，还含有较高浓度的盐类、---胺、---葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体dna或rna等。
（2）杂交液中含有较高浓度的na+可使杂交率增加，可以减低探针与组织标本之间的静电结合。---胺可使tm降低，杂交液中含每1%的---胺可分别使rna：rna，rna：dna，dna：dna的杂交温度降低0.35℃，0.5℃和0.65℃。，所以杂交液中加入适量的---胺，可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。---葡聚糖能与水结合，从而减少杂交液的有效容积，提高探针有效浓度，以达到提高杂交率的目的（尤其对双链---探针）。
在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体dna或rna等，都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特---结合，以减低背景。
原位杂交第二天
1.
1）将探针回收，放于－20c保存（通常探针可重复使用十次左右）。
2）加入50%---胺/2xssct溶液1毫升，60℃，放置30分钟，重复一次。
3）置换2xssct1ml，60℃，放置15分钟。
4）置换0.2xssct1ml，60℃，放置30分钟，重复一次。
2.
1）用mabt洗两次，每次五分钟，放在摇床轻轻摇动。
2）室温下加1ml 1：2：7溶液，时间为一小时。
3）按1：3000的比例在1：2：7溶液中加入酶连，酵母双杂交技术服务，4c 冰箱过夜。
适用场景
1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用；
2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点；
3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白；
4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽；
5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物；
6、绘制蛋白质相互作用图谱。
酵母双杂交技术的优点
1、无需纯化蛋白；
2、检测在活1细胞内进行，可以在一定程度上代表体内的真实情况；
3、检测的结果是基因表达产物的积累效应，因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用；
4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cdna---，并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。
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