





荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,rna原位杂交技术服务,fish)是在20世纪80年代末在性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非性分子细胞遗传技术,以荧光标记取代同位素标记而形成的一种新的原位杂交方法,探针首先与某种介导分子(reporter molecule)结合,杂交后再通过细胞化学过程连接上荧光染料[1,2].fish的基本原理是将dna(或rna)探针用特殊的核苷酸分子标记,然后将探针直接杂交到染色体或dna纤维切片上,再用与荧光素分子偶联的单与探针分子特---结合来检测dna序列在染色体或dna纤维切片上的定性、定位、相对定量分析.fish具有安全、快速、灵敏度高、探针能长期保存、能同时显示多种颜色等优点,不但能显示中期分裂相,还能显示于间期核.同时在荧光原位杂交基础上又发展了多彩色荧光原位杂交技术和染色质纤维荧光原位杂交技术.

1,组化
实验原理:组化(ihc),是应用抗原与特---结合的原理,通过酶标与底物反应显色,从而对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究,称为组织化学技术。组化(ihc)具有特---强、敏感度高、定位准确的优点。
1, 荧光
实验原理:荧光(if),是应用抗原与特---结合的原理,通过荧光标记对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。目前皮诺飞生物主要可以对石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、组织芯片进行荧光检测。皮诺飞生物目前已突破传统的荧光双标---,开发出多色荧光技术(多可达7色)。
原位杂交杂交液注意事项:
(1)杂交液内除含一定浓度的标记探针外,还含有较高浓度的盐类、---胺、---葡聚糖、牛血1清白蛋白及载体dna或rna等。
(2)杂交液中含有较高浓度的na+可使杂交率增加,可以减低探针与组织标本之间的静电结合。---胺可使tm降低,杂交液中含每1%的---胺可分别使rna:rna,rna:dna,dna:dna的杂交温度降低0.35℃,0.5℃和0.65℃。,所以杂交液中加入适量的---胺,可避免因杂交温度过高而引起的组织形态结构的破坏以及标本的脱落。---葡聚糖能与水结合,从而减少杂交液的有效容积,提高探针有效浓度,以达到提高杂交率的目的(尤其对双链---探针)。
在杂交液中加入牛血1清白蛋白及载体dna或rna等,都是为了阻断探针与组织结构成分之间的非特---结合,以减低背景。

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