玉米原位杂交检测技术服务-武汉科锐诺生物

tunel流式细胞凋亡检测服务通常称为细胞程序性死1亡，是由基因控制的主动性细胞死1亡过程。越来越多数据发现，细胞凋亡与多种---密切相关，如癌细胞具有连续增殖、抵抗细胞凋亡能力，利用流式细胞仪分析细胞凋亡可为肿1瘤诊断，疗1效评价和预后预测提供了重要的参考指标。

　　tunel（tdt-mediated dutp nick end labeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核dna的断裂情况，其原理是生物素biotinylate标记的dutp在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（tdt enzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂dna的3’-oh末端，并与连接辣根---化酶（hrp，horse-radish peroxidase）的链霉亲和素streptavidin特---结合，后者又与pod底物h2o2、二氨1基联1---1胺（dab）产生深棕色反应，特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即---察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有dna断裂，因而没有3‘-oh形成，很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿1瘤药的药1效评价，以及通过双色法确定细胞类型和分化阶段。

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，玉米原位杂交检测技术服务，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。