分子病理技术服务-科锐诺

意义

在研究dna分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段，在适宜的条件下，能过氢键结合，形成dna-dna、dna-rna或 rna-rna 双键分子的特点，应用带有标记的（有性同位素，如3h、35s、32p、荧光素生物素、等非性物质）dna或rn---段作为---探针，分子病理技术服务，与组织切片或细胞内待测---（rna或dna）片段进行杂交，然后可用自显影等方法予以显示，在光镜或电镜下观察目的 mrna或dna 的存在并定位；用原位杂交技术，可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有---的敏感性和特---，可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。

 滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗。

  .滴加生物素化鼠抗地1高辛：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

滴加sabc：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

滴加生物素化---化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用pbs洗5分钟×4次。

dab显色：使用dab显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂ａ，ｂ，c各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配dab显色剂后显色。充分水洗。

.苏1木素复染，充分水洗。

酒精脱水，二甲1---透明，封片。

.杂交　（1） 盛有2×ssc的塑料盘同，将干烤的滤膜飘浮在液面上，浸湿5分钟。（2） 将滤膜转到200ml预洗液的玻璃皿中。滤膜何叠在一起，放于溶液中。用保鲜膜盖住玻璃皿，放---于培养箱内的旋转平台上。于50℃处理30分钟。在这一步及以后的所有步骤中，应缓缓摇动滤膜，防止它们粘在一起。（3） 用泡过预洗液的吸水棉纸轻轻地从膜表面拭去---碎片，以降低杂交背景而不影响阳性杂交信号的强度和清晰度。（4） 将滤膜转到盛有150ml预杂交液的玻璃中，在适宜温度（即在水溶液中杂交时用68℃，而在50%---胺中杂交时用42℃）下，预杂交1-2小时。（5） 将32 p标记的双链dna探针于100℃加热5分钟，迅速置于冰浴中。单链探针不必变性。将探针加到杂交袋中杂交过夜。杂交期间，盛滤膜的容器应盖严，以防液体蒸发。




分子病理技术服务-武汉科锐诺生物(图)由武汉科锐诺生物科技有限公司提供。武汉科锐诺生物科技有限公司是湖北 武汉 ,技术合作的见证者，多年来，公司贯彻执行科学管理、---发展、诚实守信的方针，满足客户需求。在科锐诺---携全体员工热情欢迎---垂询洽谈，共创科锐诺美好的未来。
     联系我们时请一定说明是在100招商网上看到的此信息，谢谢！
     本文链接：https://tztz100000346509.zhaoshang100.com/zhaoshang/285977056.html
     关键词：