水稻rna原位杂交检测服务-科锐诺

滴加fitc-tsa：滴加fitc-tsa试剂，避光室温反应5min。后tbst洗3次×10min，pbs洗1次×5min。

dapi复染核：切片滴加dapi染液，避光孵育8min，冲洗后滴加抗荧光淬灭封片1剂封片。

镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。（紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；fam(488)绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm，发绿光；cy3红光激发波长510-560，发射波长590nm，发红光。）

菌落的裂解及dna结合于纤维素滤膜

（1） 在一张保鲜膜上制作一个装有0.5mol/l naoh的小洼（0.75ml），使菌落面朝上，将滤膜放到小洼上，展平保鲜膜，使滤膜均匀湿润，让滤膜留于原处2-3分钟。

（2） 用干纸巾从滤膜的下方吸干滤膜，用一张新的保鲜膜和新配制的0.5mol/l naoh重复步骤（1）。

（3） 吸干滤膜，将滤膜转移到新的带有1mol/l tris·cl(ph7.4）的保鲜膜洼上。5分钟后吸干滤膜，再重复一次该步骤。

（4） 吸干滤膜，把它转移到有1.5mol/l nacl、0.5mol/l tris·cl (ph7.4）的保鲜膜小洼上5分钟后吸干滤膜，转移到一张干的滤纸上，置于室温20-30分钟，使滤膜干燥。

（5） 将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃干烤2小时，固定dna。

（6） 将固定在膜上的dna与32 p标记的rna进行杂交。