





意义
在研究dna分子原理的基础上发展起来的一种技术。其基本原理是两条核苷酸单链片段,在适宜的条件下,能过氢键结合,形成dna-dna、dna-rna或 rna-rna 双键分子的特点,应用带有标记的(有性同位素,如3h、35s、32p、荧光素生物素、等非性物质)dna或rn---段作为---探针,与组织切片或细胞内待测---(rna或dna)片段进行杂交,然后可用自显影等方法予以显示,在光镜或电镜下观察目的 mrna或dna 的存在并定位;用原位杂交技术,可在原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基因表达。此方法有---的敏感性和特---,可进一步从分子水平来探讨细胞的功能表达及其调节机制。已成为当今细胞生物学、分子生物学研究的重要手段。
分子病理学是与分子生物学、细胞遗传学等学科相互渗透,在蛋白质和---等生物大分子水平上研究---病因、发病机制、形态变化及功能损害等方面发生和发展规律的新的分支学科,对---的病因、发展、发病机制及形态变化,从传统形态学概念深入至分子或基因水平,分子病理已成为肿1瘤病理研究中重要的内容和手段。细胞特---mrna转录的定位,可用于基因图谱,基因表达和基因组进化的研究;
荧光原位杂交技(fish)原理:是利用荧光标记的特异---探针与细胞内相应的靶dna分子或rna分子杂交,通过在荧光显微镜或共---激光扫描仪下观察荧光信号,来确定与特异探针杂交后被染色的细胞或细胞器的形态和分布,或者是结合了荧光探针的dna区域或rna分子在染色体或其他细胞器中的定位。
荧光原位杂交技(fish)实验步骤:
1、组织固定:组织取出洗净后立即放入固定液(depc水配制)中固定2-12h。
2、脱水:组织固定完成后经梯度酒精脱水后浸蜡,包埋。
3、切片:石蜡经切片机切片,分子病理技术服务,摊片机捞片,62°烤箱烤片2h。
4、石蜡切片脱蜡至水:依次将切片放入二甲1---ⅰ 15min-二甲1---ⅱ 15min-无水---ⅰ 5min-无水---ⅱ 5min,风干,depc水浸泡。
5、---:根据组织固定时间长短,切片于修复液中煮沸10分钟,自然冷却。后基因笔画圈,根据不同组织不同指标特性,滴加蛋白酶k(20ug/ml) 37°---20min。纯水冲洗后pbs洗3次×5min。

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