分子病理技术服务-科锐诺生物

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    2024-8-6

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tunel流式细胞凋亡检测服务通常称为细胞程序性死1亡,是由基因控制的主动性细胞死1亡过程。越来越多数据发现,细胞凋亡与多种---密切相关,如癌细胞具有连续增殖、抵抗细胞凋亡能力,分子病理技术服务,利用流式细胞仪分析细胞凋亡可为肿1瘤诊断,疗1效评价和预后预测提供了重要的参考指标。

  tunel(tdt-mediated dutp nick end labeling)细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核dna的断裂情况,其原理是生物素biotinylate标记的dutp在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(tdt enzyme)的作用下,可以连接到凋亡细胞中断裂dna的3’-oh末端,并与连接辣根---化酶(hrp,horse-radish peroxidase)的链霉亲和素streptavidin特---结合,后者又与pod底物h2o2、二氨1基联1---1胺(dab)产生深棕色反应,特异准确地定位正在凋亡的细胞,因而在光学显微镜下即---察凋亡细胞;由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有dna断裂,因而没有3‘-oh形成,很少能够被染色。本试剂盒适用于组织样本(石蜡包埋、冰冻和超薄切片)和细胞样本(细胞涂片)在单细胞水平上的凋亡原位检测。还可应用于抗肿1瘤药的药1效评价,以及通过双色法确定细胞类型和分化阶段。




适用场景

1、高灵敏度地检测蛋白-蛋白的交互作用;

2、寻找在蛋白-蛋白交互作用中起关键作用的结构域或活性位点;

3、寻找与靶蛋白相互作用的新蛋白;

4、寻找具有药1物治1疗作用的小分子多肽;

5、寻找调控蛋白质相互作用的化合物;

6、绘制蛋白质相互作用图谱。

酵母双杂交技术的优点

1、无需纯化蛋白;

2、检测在活1细胞内进行,可以在一定程度上代表体内的真实情况;

3、检测的结果是基因表达产物的积累效应,因而可检测存在于蛋白质之间的微弱的或暂时的相互作用;

4、酵母双杂交系统可采用不同组织、器1官、细胞类型和分化时期材料构建cdna---,并能分析细胞质、细胞核等多种亚细胞部位的蛋白。









将少数菌落转移到纤维素滤膜上

(1) 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。

(2) 用无菌---将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。

(3) 倒置平板,于37℃培养至划线的---菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。

(4) 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。

(5) 用parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,直至获得杂交反应的结果。

(6) 裂解---,按本段下面所述方法,使释放的dna结合于纤维素滤膜。




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